多肽熒光標記由于沒(méi)有放射性，實(shí)驗操作簡(jiǎn)單。因此，目前在生物學(xué)研究中多肽熒光標記應用非常廣泛，多肽熒光標記方法與熒光試劑的結構有關(guān)系，對于有游離羧基的采用的方法與接多肽反應相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。 在N端標記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素，通常會(huì )伴有最后一個(gè)氨基酸的去除，但當有一個(gè)間隔器如氨基己酸，或者是通過(guò)非酸性環(huán)境將目的多肽從樹(shù)脂上切下來(lái)時(shí)，這種情況可避免在切割的過(guò)程中被TFA切割掉。
        人們利用利用熒光標記的多肽來(lái)檢測目標蛋白的活性，并將 其發(fā)展的高通量活性篩選方法應用于疾病治療靶點(diǎn)蛋白的藥物篩選和藥物開(kāi)發(fā)（例如，各種激 酶、磷酸酶、肽酶等）。
        正肽生化能夠提供技術(shù)成熟的各種熒光標記多肽。

下面是一些常見(jiàn)的多肽修飾熒光物質(zhì)結構：




FITC標記

      FITC(異硫氰酸熒光素)具有比較高的活性，我們公司可以通過(guò)兩種方式將FITC標記于多肽 上：(1) 將FITC標記于賴(lài)氨酸（Lys）或被選擇性地脫保護的鳥(niǎo)氨酸（ornithine）側鏈氨基 上；(2) 將FITC標記于多肽N端氨基。

      當在N端標記時(shí)，建議在最后一個(gè)氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入 烷基間隔器（alkyl spacer），如氨基己酸（Ahx）。鏈接切割需要酸性環(huán)境，在N端標記FITC 的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素，通常會(huì )伴有最后一個(gè)氨基酸的去除，但當有一個(gè)間隔器 如氨基己酸，或者是通過(guò)非酸性環(huán)境將目的肽從樹(shù)脂上切下來(lái)時(shí)，這種情況可避免?？臻g位阻 被認為是在熒光染料前使用Ahx的主要原因，而不是為什么FITC不能直接偶聯(lián)在多肽上的原因。

      Ahx或b-Ala均可作為間隔器用于FITC標記的多肽上。

 

普通熒光修飾

熒光修飾中文名稱(chēng)	N端	N端帶有linker
生物素標記多肽	Biotin-	Biotin-Ahx-
異硫氰酸熒光素	FITC-	FITC-Ahx-
5-羧基熒光素	5-FAM-	5-FAM-Ahx-
丹磺酰熒光素	Dansyl-	Dansyl-Ahx-
5-羧基四甲基羅丹明	TMR-  （TAMRA-）	TMR-Ahx-  （TAMRA-Ahx-）

通過(guò)Lys側鏈氨基連接的熒光修飾

多肽N端	多肽序列中間	N端帶有linker
生物素標記多肽	Biotin-	多肽C端
Lys(Biotin)-	-Lys(Biotin)--	-Lys(Biotin)
Lys(FITC)-	-Lys(FITC)-	-Lys(FITC)
Lys(5-FAM)-	-Lys(5-FAM)-	-Lys(5-FAM)
Lys(Dansyl)-	-Lys(Dansyl)-	-Lys(Dansyl)
Lys(TMR)-	-Lys(TMR)-	-Lys(TMR)
Lys(Dnp)-	-Lys(Dnp)-	-Lys(Dnp)

我司常做的熒光物質(zhì)的激發(fā)光波長(cháng)和發(fā)射光波長(cháng)?？晒﹨⒖歼x擇：

熒光基團	Ex（nm）	Em（nm）	熒光基團	Ex（nm）	Em（nm）
羥基香豆素	325	386	R-phycoerythrin (PE) (489)	565	578
丹磺酰氯	340	578	Rhodamine Red-X	560	580
AMC	345	445	Tamara	565	580
甲氧基香豆素	360	410	Alexa fluor 555	556	573
Alexa fluor 系列	345	442	Alexa fluor 546	556	573
氨基香豆素	350	445	Rox	575	602
Dabcyl	453	-	Alexa fluor 568	578	603
Cy2	490	510	Texas Red	589	615
FAM	495	517	Alexa fluor 594	590	617
Alexa fluor 488	494	517	Alexa fluor	621	639
FITC	495	519	Alexa fluor 633	650	668
Alexa fluor 430	430	545	Cy5 (625)	650	670
5-FAM	492	518	Alexa fluor 660	663	690
Alexa fluor 532	530	530	Cy5.5	675	694
HEX	535	556	TruRed	490; 675	695
5-TAMRA	542	568	Alexa fluor 680	679	702
Cy3	550	570	Cy7	743	767
TRITC	547	572	Cy3.5	581	596